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二疫情报告和诊断2（第2页）

能引起变态反应的物质（病原体或其产物或抽提物）称为变应原，如结核菌素、鼻疽菌素等，将其注入患病动物时，可引起局部或全身反应，故可用于传染病的诊断。

4.分子生物学诊断

分子生物学诊断又称为基因诊断。

主要是针对不同病原微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行测定。

自1976年以来，基因诊断方法取得巨大进展。

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建立了DNA限制性内切酶图谱分析、核酸电泳图谱分析（如鸡传染性法氏囊病病毒、呼肠孤病毒等都有特征性电泳图谱条带）、寡核苷酸指纹图、核酸探针（Northern杂交、Southerm杂交、原位杂交、斑点杂交等）、聚合醇链反应（polymerasechainreaction，PCR）以及新近几年发展起来的DNA芯片（DNAchip）技术等。

在传染病诊断方面，具有代表性的技术主要有三大类：PCR技术、核酸探针和DNA芯片技术。

（1）PCR技术：

又称为体外基因扩增技术，诞生于1985年，由美国PE-cetus公司Mullis等人发明，1987年得到美国专利局的专利授权。

它不仅在疾病诊断领域而且在整个生命科学领域都是应用最广泛、最受青睐的技术。

PCR技术用于传染病的诊断主要是检测病原核酸，不仅可以检测活的病原体，而且还可检出已灭活的病原体，甚至是存放多年的病理标本，只要病原体的核酸未降解。

因此，当由于各种原因无法进行病原分离与鉴定时（如人工方法不能培养或极端危险不宜培养），该技术将发挥巨大作用，既克服了技术难题，又安全可靠。

传染病的病原体主要有真核生物、原核生物和非细胞型生物（病毒）三大类。

每类病原体都有其特异性的核酸序列。检测出特异性核酸就能确定致病的微生物，从而确诊是哪种传染病。

PCR技术具有高度敏感性和特异性，可从10?个细胞中检出一个被病毒感染的细胞，可将同一病原的不同毒株或菌株区分开来，这是一般诊断方法难以办到的。

同时，PCR方法简便、快速，目前已广泛应用到几乎所有传染病的检测。

另外，由PCR技术与其他技术相结合又衍生出一系列相关技术，如反转录PCR（RT-PCR）、免疫PCR、抗原捕获PCR、毛细管PCR、套式PCR（NestedPCR）、重组PCR、多重PCR、荧光定量PCR等。

（2）核酸探针技术：

核酸探针又称为基因探针或核酸分子杂交技术。

该技术有三大组成部分：

待检核酸（模板），固相载体（NC硝酸纤维膜或尼龙膜），同位素、酶或荧光材料等标记的已知核酸片段（探针）。

该方法敏感性高，检测一个单基因仅需10?拷贝，能检测出低至10ˉ13gDNA，用单抗方法则至少需要10u0027抗原分子；特异性强，可以从混合标本中正确鉴定出目的病原微生物，而且可从一个标本中同时检测几种核酸。

核酸探针诊断技术可用于所有病原体的特异诊断及分类鉴定；在混有大量杂菌或混合感染物中直接检出主要致病原，包括难以在体外培养的病原，检出隐性感染的动物，动物产品或食品的卫生检验。

但该技术由于操作复杂、耗时较长，特别是缺少商品化探针等原因，故仅用于科学研究，还从未在兽医临床诊断实践工作中应用过，因此无法与PCR技术相提并论。

（3）DNA芯片技术：

DNA芯片又称为基因芯片（genechip）、微阵列（microarray），属于生物芯片的一种。

根据微阵列上探针不同，DNA芯片又分为寡核苷酸芯片和cDNA芯片。

其技术和设备日趋成熟，在医学、遗传学等许多领域已有产品供应，例如筛选检测HIV蛋白酶基因和反转录酶基因突变的DNA芯片，某些癌症基因的诊断芯片，大肠杆菌、酵母的蛋白表达谱芯片，金黄色葡萄球菌、白色念珠菌DNA芯片等。

国外已有用于动物传染病诊断的报道，国内目前仍处于技术移植、探索和研究阶段，关键是试剂的商品化问题。

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